染色及透射电镜 - 沿途伙伴

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项目介绍

生物透射电镜介绍：透射电镜，即透射电子显微镜（Transmission Electron Microscope，简称 TEM），是一种最高分辨率可达到0.1-0.2纳米的显微镜，是观察和研究超微结构的重要工具。在生物科学研究方面，透射电镜可用来观察细胞整体结构、细胞亚细胞结构，包括（植物）细胞壁、细胞膜、细胞核和各种细胞器的变化、外源物质（如病原微生物、各种纳米颗粒）与细胞的关系，如外源物质进入细胞内部的方式、在细胞内的分布情况、细胞对外界刺激的反应（包括自噬、凋亡、坏死等）。

预约前请务必阅读

前处理方法：

您需要提供的样品：收集细胞/组织取样（新鲜迅速取材），置于1.5ml尖底离心管内，加入预冷的终浓度为2.5%的戊二醛和2%多聚甲醛固定液（固定液加到⅘离心管，使样品完全浸没在固定液中），放置于4℃过夜，请不要倒弃固定液，一般固定12h或过夜后可寄送。

具体取材及固定方法如下：

1.对于细胞类^{，106以上的细胞，用新鲜的培养液兴奋细胞，用细胞刮刀刮下来或者酶消化，加入预冷的}终浓度为2.5%的戊二醛和2%多聚甲醛溶液，固定半小时，1500-3000转离心，5-10min，收集细胞于管底肉眼可见黄豆或者绿豆粒大小，弃上清，沿管壁缓慢加入4℃新的固定液，然后放入4°C冰箱过夜。

2.对于组织类，新鲜取材，取材位置准确，组织大小尽量在1-2mm³（长1-5mm×宽1mm×高1mm），离体取材后请尽快投入4℃预冷的固定液中，然后放入4°C冰箱固定过夜。

3.对于细菌类，吸取OD0.5-0.8的培养物，加入预冷的终浓度为2.5%的戊二醛和2%多聚甲醛溶液，固定半小时，3000-5000转离心，5-10min，离心后弃上清，收集菌体沉淀于管底黄豆大小，可以用预冷的pH7.2的PB洗1-2次，弃上清，沿管壁缓慢加入新的4℃预冷的固定液，然后放入4°C冰箱过夜。

样本编号建议按照字母或数字来，标记清晰，样本量充足。

项目案例

样品要求

1.不需要稀释的液体样品需要准备0.3毫升以上，最好1毫升，用2毫升左右ep管装并封口胶封好口；注明样品成分和类型，预期形貌和尺寸；一般会拍摄10张左右的照片；

2.默认染色制样方式：取10微升液体滴铜网，用1%磷钨酸(或饱和醋酸铀)染色制样并清洗，室温干燥制样后放置一个小时以上；细菌、真菌、病毒、外泌体、细胞、脂类、胶束、蛋白默认吸附5到10分钟，染色1分钟，不超声也不稀释；超声可能会改变样品的形态，样品浓度很难用肉眼判断，若需要超声和稀释，请订单中明确；

3.染色制样结果受样品纯度和浓度的影响较大，若样品中含有较多的有机盐和杂质，染色效果一般较差；

4.病毒、外泌体需要浓缩，50微升以上；

5.该项目不支持回收，请自行留样；

6.一般送样方式为4℃冷藏，冷冻送样需要在订单中特别指明（比如外泌体和病毒样品）；上门取样样品，样品如需冷藏，请一定准备冰块或干冰和泡沫箱；

7. 细菌和病毒等需要灭活处理，有传染性的样品不做测试；

8. 注明图片标尺和对应的图片张数，数量不超过10张。如未注明，不接受因标尺问题导致的免费补拍或重拍（标尺100nm是仪器的极限，通常拍出的样品分辨率低，不建议选择该标尺）。我们尽量会找您预期的图片形貌，但是最终以实际形貌为准。

常见问题

Q1、低压的范围是？

80-120kv

Q2、哪些样品一般需要负染？

观察形貌的生物和有机类，如细菌、病毒、胶束等。

Q3、染色剂有哪些？

磷钨酸、醋酸铀。

Q4、低压可以拍高分辨吗？

不能，因为电压低，能量小，分辨率达不到要求。

Q5、送样方式？

易变质的需要低温冷藏，病毒、外泌体需要浓缩并冷冻。

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